規(guī)格：50T 一、測定意義 谷胱甘肽過氧化物酶（Glutathione peroxidase，GSH-PX）是機(jī)體內(nèi)廣泛存在的一種重要的催化過氧化氫分解的酶。它特異的催化還原型谷胱甘肽（GSH）對(duì)過氧化氫的還原反應(yīng)，可以起到保護(hù)細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)和功能的完整的作用。GSH-PX的活性中心是硒半胱氨酸，硒是GSH-PX的必須部分，每克分子酶含4克原子硒。測定GSH-PX的活力可以作為衡量機(jī)體硒水平的一項(xiàng)生化指標(biāo)。 二、測定原理 谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-PX）可以促進(jìn)過氧化氫還原型谷胱甘肽（GSH）反應(yīng)生成水及氧化型谷胱甘肽（GSSG）,谷胱甘肽過氧化物酶的活力可用其酶促反應(yīng)的速度來表示，測定此酶促反應(yīng)中還原型谷胱甘肽的消耗，則可求出酶的活力。 GSH-PX的活力以催化GSH的反應(yīng)速度來表示，由于這二個(gè)第五在沒有酶的條件下，也能進(jìn)行氧化還原反應(yīng)（稱非酶促反應(yīng)），所以zui后計(jì)算次酶活力時(shí)必須扣除非酶促反應(yīng)所引起的GSH減少的部分。 GSH量的測定：GSH的二硫代二硝基苯甲酸作用生成5-硫代二硝基苯甲酸陰離子呈現(xiàn)較穩(wěn)定的黃色，在412nm處測其吸光度即可計(jì)算出GSH的量。 三、實(shí)驗(yàn)中所需的儀器和自備的試劑 1. 412nm的分光光度計(jì) 2. 37℃恒溫水浴鍋 3. 臺(tái)式離心機(jī) 4. 可調(diào)式移液器 5. 蒸餾水 四、試劑盒的組成和配制 1、100管試劑盒的組成和配制： a、100管試劑盒的組成和保存： | 試劑編號(hào) | 名稱 | 數(shù)量及保存條件 | | 1 | 貯備液 | 2ml 1瓶 4℃保存6個(gè)月 | | 2 | 甲粉 | 1瓶 | | 乙粉 | 1瓶 | | 3 | 粉劑 | 1瓶 | | 4 | 粉劑 | 1瓶 避光4℃保存 | | 5 | 粉劑 | 4支 避光4℃保存 | | 6 | GSH標(biāo)準(zhǔn)品粉劑 | 3.07mg 4支 | | 7 | GSH標(biāo)準(zhǔn)品溶劑貯備液 | 10ml 1瓶 4℃保存 | b、試劑的配制和保存： | 試劑編號(hào) | 應(yīng)用液的配制 | 保存條件 | | 1 | 用時(shí)取0.1ml加蒸餾水至10ml，也就等于是100倍稀釋配成應(yīng)用液?，F(xiàn)用現(xiàn)配；需多少配多少 | 4℃ | | 2 | 甲粉：加90-100℃的熱蒸餾水170ml，充分*溶解 | | | 乙粉：加90-100℃的熱蒸餾水5ml，充分*溶解 | | | 試劑二應(yīng)用液的配制：將已配好的甲乙兩種溶液混合。此為過飽和溶液，室溫靜置冷卻后，如有結(jié)晶，則取上清進(jìn)行實(shí)驗(yàn) | 4℃或室溫保存 | | 3 | 加蒸餾水200ml溶解 | | | 4 | 加蒸餾水50ml溶解 | 避光4℃保存 | | 5 | 每支加蒸餾水10ml溶解 | 避光冷藏保存5天 | | 7 | 標(biāo)準(zhǔn)品溶劑應(yīng)用液：GSH標(biāo)準(zhǔn)品溶劑貯備液：雙蒸水=1：9即10倍稀釋配成應(yīng)用液；按所需量現(xiàn)用現(xiàn)配 | 4℃保存 | C、GSH應(yīng)用液的配制： | 1mmol/L GSH溶液 | GSH的分子量為307，每次測定前將1支3.07mg的GSH標(biāo)準(zhǔn)品粉劑加到GSH標(biāo)準(zhǔn)品的溶劑應(yīng)用液中，定容至10ml即為1mmol/L的GSH溶液，現(xiàn)用現(xiàn)配。 | | 100u mol/L GSH溶液 | 取1mmol/L GSH溶液2ml加GSH標(biāo)準(zhǔn)品溶劑應(yīng)用液18ml定容至20ml，作標(biāo)準(zhǔn)曲線用，若不做標(biāo)準(zhǔn)曲線可以不配。 | | 20umol/L的GSH標(biāo)準(zhǔn)溶液 | 取1mmol/L GSH溶液0.2ml加GSH標(biāo)準(zhǔn)品溶劑應(yīng)用液定容至10ml。即為20umol/L的GSH標(biāo)準(zhǔn)溶液。 | 2、50管試劑盒的組成和配制： a、50管試劑盒的組成和保存： | 試劑編號(hào) | 名稱 | 數(shù)量及保存條件 | | 1 | 貯備液 | 1ml 1瓶 4℃保存6個(gè)月 | | 2 | 甲粉 | 1瓶 | | 乙粉 | 1瓶 | | 3 | 粉劑 | 1瓶 | | 4 | 液體 | 25ml 1瓶 避光4℃保存 | | 5 | 粉劑 | 2支 避光4℃保存 | | 6 | GSH標(biāo)準(zhǔn)品粉劑 | 3.07mg 2支 | | 7 | GSH標(biāo)準(zhǔn)品溶劑貯備液 | 5ml 1瓶 4℃保存 | b、試劑的配制和保存： | 試劑編號(hào) | 應(yīng)用液的配制 | 保存條件 | | 1 | 用時(shí)取0.1ml加蒸餾水至10ml。也就等于是100倍稀釋配成應(yīng)用液?，F(xiàn)用現(xiàn)配。 | 4℃ | | 2 | 甲粉：加90-100℃的熱蒸餾水85ml，充分*溶解 | | | 乙粉：加90-100℃的熱蒸餾水25ml，充分*溶解 | | | 試劑二應(yīng)用液的配制：將已配好的甲乙兩種混合。此為過飽和溶液，室溫靜置冷卻后，如有結(jié)晶，則取上清進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。 | 4℃或室溫保存 | | 3 | 加蒸餾水100ml溶解 | | | 4 | 直接加量 | 避光 4℃保存 | | 5 | 每支加蒸餾水10ml溶解 | 避光冷藏 保存五天 | | 7 | 標(biāo)準(zhǔn)品溶劑應(yīng)用液：GSH標(biāo)準(zhǔn)品溶劑貯備液：雙蒸水=1：9即10倍稀釋配成應(yīng)用液；按所需量現(xiàn)用現(xiàn)配 | 4℃保存 | C、GSH應(yīng)用液的配制： | 1mmol/L GSH溶液 | GSH的分子量為307，每次測定前將1支3.07mg的GSH標(biāo)準(zhǔn)品粉劑加到GSH標(biāo)準(zhǔn)品的溶劑應(yīng)用液中，定容至10ml即為1mmol/L的GSH溶液，現(xiàn)用現(xiàn)配。 | | 100u mol/L GSH溶液 | 取1mmol/L GSH溶液2ml加GSH標(biāo)準(zhǔn)品溶劑應(yīng)用液18ml定容至20ml，作標(biāo)準(zhǔn)曲線用，若不做標(biāo)準(zhǔn)曲線可以不配。 | | 20umol/L的GSH標(biāo)準(zhǔn)溶液 | 取1mmol/L GSH溶液0.2ml加GSH標(biāo)準(zhǔn)品溶劑應(yīng)用液定容至10ml。即為20umol/L的GSH標(biāo)準(zhǔn)溶液。 | |
