利用基因定點(diǎn)修飾技術(shù)CRISPR-Cas系統(tǒng)，可快速地在單倍體干細(xì)胞上進(jìn)行定位的基因修飾或敲除，并且處理后的細(xì)胞仍能維持單倍體和多能性狀態(tài)。尤為重要的是，該工作證明了大鼠單倍體胚胎干細(xì)胞同樣具有替代精子與卵母細(xì)胞“受精”并產(chǎn)生健康大鼠的能力。 單倍體胚胎干細(xì)胞同時具有單倍體細(xì)胞和胚胎干細(xì)胞的特性，由于其只含有一套染色體，不存在等位基因在基因功能上的補(bǔ)償作用，因此是研究隱性基因功能的理想模型。同時，其胚胎干細(xì)胞的特性又可以將基因修飾直接遺傳給后代，從而避免了其他轉(zhuǎn)基因方法種系嵌合等方面的要求，可以極大提高基因修飾的效率及應(yīng)用范圍。 通過種系嵌合和替代精子進(jìn)行卵胞質(zhì)注射兩種途徑，該團(tuán)隊(duì)都成功獲得了健康的攜帶基因修飾的大鼠，從而證明大鼠孤雄單倍體胚胎干細(xì)胞可以將基因修飾快速地遺傳給后代，為研究基因功能提供了便利。 此外，也對*大鼠ELISA試劑盒進(jìn)行了研究，應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中大鼠性激素結(jié)合球蛋白（SHBG）elisa試劑盒 水平。用純化的大鼠性激素結(jié)合球蛋白（SHBG）elisa試劑盒使用說明書抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入類性激素結(jié)合球蛋白（SHBG）elisa試劑盒 ，再與HRP標(biāo)記的類性激素結(jié)合球蛋白（SHBG）elisa試劑盒 抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的類性激素結(jié)合球蛋白（SHBG）elisa試劑盒 呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣品中大鼠性激素結(jié)合球蛋白（SHBG）elisa試劑盒 濃度。 此次的研究成果從小鼠之外的哺乳動物中獲得了具有發(fā)育功能的單倍體胚胎干細(xì)胞系，而且利用CRISPR-Cas技術(shù)完成對大鼠單倍體胚胎干細(xì)胞的多基因敲除，為建立用于大規(guī)?；蚝Y選的純合的基因突變細(xì)胞庫打下基礎(chǔ)。鑒于大鼠在生理上比小鼠更類似于人類，這一工作將對人類疾病模型研發(fā)和開展基因功能研究起到重要的推動作用。 |
