【產(chǎn)品名稱】通用名稱：豬偽狂犬病毒gE 抗體（IgG）診斷試劑盒（酶聯(lián)免疫法）英文名稱：Swine Pseudorabies Virus gE Antibody Test Kit （ELISA）, gE Ab【包裝規(guī)格】96×2 測試/盒【預(yù)期用途】本試劑盒用于定性測定豬血清中偽狂犬病毒gE 蛋白的IgG 抗體。用于區(qū)別臨床野毒感染產(chǎn)生的抗體和用gE 基因缺失疫苗免疫產(chǎn)生的抗體、感染豬的血清學(xué)診斷以及豬偽狂犬病毒病的流行病學(xué)調(diào)查。【檢驗(yàn)原理】本試劑盒應(yīng)用固相酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）原理，由包被有高純度的gE 蛋白的微孔反應(yīng)板、辣根過氧化物酶標(biāo)記的抗豬IgG 及其它試劑配套組成。其反應(yīng)機(jī)理為包被抗原與樣本中的gE-IgG 結(jié)合，再與酶標(biāo)抗豬IgG 抗體形成“包被抗原+gE-IgG+酶標(biāo)抗豬IgG 抗體”復(fù)合物，加入顯色劑，通過酶催化反應(yīng)顯色。顯色深淺與gE-IgG 的量成正比，當(dāng)顯色超過設(shè)定的臨介值時(shí)結(jié)果判為陽性，表明豬有自然感染。【主要組成成份】1． gE 抗原包被板96T×2 塊包被有g(shù)E 蛋白抗原2． 酶標(biāo)記物（黃蓋） 22ml×1 瓶含辣根過氧化物酶標(biāo)記的抗豬IgG 抗體3． 樣本稀釋液（透明蓋） 25ml×1 瓶主要成份為0.01M PBS 緩沖液4． 濃縮洗滌液（20×）（白蓋） 50ml×1 瓶PBST 緩沖液，用前用去離子水20 倍稀釋5． gE-IgG 陰性對(duì)照血清（綠蓋） 1.5ml×1 瓶主要成份為gE-IgG 陰性血清6． gE-IgG 陽性對(duì)照血清（紅蓋） 1.5ml×1 瓶主要成份為gE-IgG 陽性血清7． 顯色劑A（紫蓋） 12ml×1 瓶主要成份為過氧化脲8． 顯色劑B（黃蓋） 12ml×1 瓶主要成份為TMB9． 終止液（藍(lán)蓋） 12ml×1 瓶主要成份為H2SO410． 蓋板膜6 張11． 說明書1 份不同批號(hào)的試劑組份不可混用。【儲(chǔ)存條件及有效期】于2℃～8℃避光保存，防止冷凍，有效期6 個(gè)月。【適用儀器】1．酶標(biāo)儀，單波長450nm 測量或雙波長450/630nm 測量。2．ELISA 用洗板機(jī)。3．微量移液器。4．水浴箱或恒溫箱。5．微量振蕩器。【樣本要求】1．本試劑檢測的樣本為豬血清，樣本應(yīng)無菌采集，2℃～8℃貯存不超過一周，長期應(yīng)在-20℃以下保存。2．避免使用嚴(yán)重溶血、有沉淀物、含懸浮纖維蛋白及污染長菌的樣本。3．樣本中含有常規(guī)用量的EDTA、枸櫞酸鈉或肝素鈉等抗凝劑不影響本實(shí)驗(yàn)。【檢驗(yàn)方法】1．加樣：根據(jù)樣本數(shù)量，取所需板條。單波長檢測時(shí)，需設(shè)空白對(duì)照1 孔（不加任何液體）；雙波長檢測時(shí)，不設(shè)空白對(duì)照孔。設(shè)陰、陽性對(duì)照各2 孔，分別加入不稀釋的陰、陽性對(duì)照血清100μl 于相應(yīng)孔中。其余為樣本孔，每孔加100μl 樣本稀釋液，再分別加入樣本10μl（加入樣本后顏色會(huì)有變化）。2．溫育：加好樣后振蕩10 秒，充分混勻，置37℃溫育30 分鐘。3．洗板：甩去孔內(nèi)液體，用洗滌液（濃縮洗滌液用去離子水以20 倍稀釋）注滿反應(yīng)板孔，洗滌5 次，每次停留1 分鐘，zui后一次洗后拍干。4．加酶：每孔加酶標(biāo)記物100μl，注意：空白孔不加酶標(biāo)記物，也不加其他任何液體。5．溫育：置37℃溫育30 分鐘。6．洗板：同上洗滌。7．顯色：每孔加顯色劑A、B 各50μl，振蕩混勻，37℃避光反應(yīng)15分鐘。8．終止：每孔加終止液50μl，振蕩10 秒，充分混勻。終止后5～30 分鐘內(nèi)讀數(shù)。9．讀數(shù)：單波長檢測時(shí)，酶標(biāo)儀檢測波長為450nm，以空白孔調(diào)零，讀取各孔吸光度值（A 值）；雙波長檢測時(shí)，以450nm 為主波長、630nm 為參比波長，讀取各孔吸光度值（A 值）。注意：單波長檢測時(shí)，若酶標(biāo)儀讀數(shù)前沒有以空白孔調(diào)零，則所得的結(jié)果均應(yīng)減去空白孔A 值再做計(jì)算和判定。10．結(jié)果判定：臨界值（CO.）= 0.15。樣本A 值（S）/臨界值（CO.）≥1，判定為gE-IgG 陽性； S/CO.＜1，判定為gE-IgG 陰性。陰性對(duì)照血清A 值應(yīng)小于0.10，陽性對(duì)照血清A 值應(yīng)大于0.70，否則試驗(yàn)不成立，需重新試驗(yàn)。注意：單波長檢測時(shí)，若酶標(biāo)儀讀數(shù)前沒有以空白孔調(diào)零，則陰陽性對(duì)照血清A 值均應(yīng)減去空白孔A 值再做判定。【參考值（參考范圍）】未自然感染豬偽狂犬病毒的健康豬群為陰性，S/CO.＜1。【檢驗(yàn)結(jié)果的解釋】1．嚴(yán)重溶血、血清中纖維蛋白分離不充分、含紅血球、有沉淀物、長菌的樣本可能導(dǎo)致假陽性。2．陽性結(jié)果用于感染豬的血清學(xué)診斷以及流行病學(xué)調(diào)查時(shí)需結(jié)合其他方法和臨床資料進(jìn)行。【產(chǎn)品性能指標(biāo)】1．特異性以本品檢測30 份陰性參比血清不出假陽性。2．敏感性以本品檢測30 份陽性參比血清不出現(xiàn)陰性。3．精密性用精密性參比品測定，CV（%）不高于15%（n=10）。4．穩(wěn)定性試劑盒在2℃～8℃放置6 個(gè)月或37℃放置3 天，檢定結(jié)果達(dá)到以上1-3 標(biāo)準(zhǔn)。【注意事項(xiàng)】1．本試劑盒僅用于體外診斷。2．本試劑盒應(yīng)按含有傳染性材料對(duì)待，操作時(shí)需戴手套穿工作衣。3．實(shí)驗(yàn)廢棄物應(yīng)經(jīng)121℃高壓蒸汽滅菌30 分鐘，或用5.0g/L 次氯酸鈉等消毒劑處理30 分鐘后廢棄。4．微孔板從冷藏環(huán)境中取出時(shí)應(yīng)在室溫中平衡至潮氣干盡后方可拆開，未用完的微孔板須放回有干燥劑的鋁箔袋并密封4℃保存。未用完的液體試劑應(yīng)蓋好瓶蓋，與其它配套組份放入試劑盒中于2℃-8℃避光保存。5．若20 倍濃縮洗滌液出現(xiàn)結(jié)晶，屬正常現(xiàn)象，放置37℃至溶解后即可。6．應(yīng)用微量移液器加入樣本及試劑，并經(jīng)常校對(duì)其準(zhǔn)確性。7．加洗滌液時(shí)應(yīng)做到滿而不溢，防止孔口有游離酶不能洗凈或各孔間的交叉污染。8．終止液有腐蝕性，若濺到皮膚或衣物上應(yīng)立即用大量清水沖洗干凈。【產(chǎn)品版本】gE V.1102
