本試劑盒只能用于科學(xué)研究，不得用于醫(yī)學(xué)診斷人（Human）軍團(tuán)菌抗體IgM（LPAb-IgM）ELISA檢測試劑盒使用說明書檢測原理試劑盒采用雙抗原一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）。往預(yù)先包被人軍團(tuán)菌IgM抗原的包被微孔中，依次加入標(biāo)本、HRP標(biāo)記的檢測抗原，經(jīng)過溫育并*洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度（OD 值），與CUTOFF值相比較，從而判定標(biāo)本中人軍團(tuán)菌抗體IgM（LPAb-IgM）的存在與否。樣品收集、處理及保存方法1. 血清：使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管，操作過程中避免任何細(xì)胞刺激，收集血液后，3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。2. 血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉(zhuǎn)離心30 分鐘取上清。3. 細(xì)胞上清液：3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。4. 組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘取上清。5. 保存：如果樣本收集后不及時(shí)檢測，請按一次用量分裝，凍存于-20℃，避免反復(fù)凍融，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。自備物品1. 酶標(biāo)儀（450nm）2. 高精度加樣器及槍頭：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL3. 37℃恒溫箱操作注意事項(xiàng)1. 試劑盒保存在2-8℃，使用前室溫平衡20 分鐘。從冰箱取出的濃縮洗滌液會(huì)有結(jié)晶，這屬于正常現(xiàn)象，水浴加熱使結(jié)晶*溶解后再使用。2. 實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回自封袋中，密封（低溫干燥）保存。3. 預(yù)處理后的樣本請按照操作步驟用樣本稀釋液適當(dāng)稀釋以達(dá)到試劑盒的的*檢測效果。4. 嚴(yán)格按照說明書中標(biāo)明的時(shí)間、加液量及順序進(jìn)行溫育操作。5. 所有液體組分使用前充分搖勻。試劑盒組成名稱 96孔配置 48孔配置 備注微孔酶標(biāo)板12 孔×8 條12 孔×4 條無陰性對照0.5mL 0.5mL 無陽性對照0.5mL 0.5mL 無檢測抗原-HRP 10mL 5mL 無20×洗滌緩沖液25mL 15mL 按說明書進(jìn)行稀釋樣本稀釋液6mL 3mL 無底物A 6mL 3mL 無底物B 6mL 3mL 無終止液6mL 3mL 無封板膜2 張2 張無說明書1 份1 份無自封袋1 個(gè)1 個(gè)無試劑的準(zhǔn)備20×洗滌緩沖液的稀釋：蒸餾水按1：20 稀釋，即1 份的20×洗滌緩沖液加19 份的蒸餾水。洗板方法1. 手工洗板：甩盡孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，靜置1min 后甩盡孔內(nèi)液體，在吸水紙上拍干，如此洗板5 次。2. 自動(dòng)洗板機(jī)：每孔注入洗液350μL，浸泡1min，洗板5 次。操作步驟1. 從室溫平衡20min 后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃。2. 設(shè)置陰、陽性對照孔和樣本孔，陰、陽性對照孔中加入陰性對照、陽性對照各50μL；3. 待測樣本孔先加待測樣本10μL，再加樣本稀釋液40μL；4. 隨后陰、陽性對照孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標(biāo)記的檢測抗原100μL，用封板膜封住反應(yīng)孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。5. 棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液，靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復(fù)洗板5 次（也可用洗板機(jī)洗板）。6. 每孔加入底物A、B 各50μL，37℃避光孵育15min。7. 每孔加入終止液50μL，15min 內(nèi)，在450nm 波長處測定各孔的OD 值。結(jié)果判斷1. 試驗(yàn)有效性：陽性對照孔OD 值平均值≥1.00；陰性對照孔OD 值平均值≤0.15。2. 臨界值（Cut off）計(jì)算：臨界值=陰性對照孔平均值+0.153. 陰性判斷：樣品OD 值＜臨界值（Cut off），樣品為陰性4. 陽性判斷：樣品OD 值＞臨界值（Cut off），樣品為陽性試劑盒性能1. 準(zhǔn)確性：陽性對照孔OD 值平均值≥1.00；陰性對照孔OD 值平均值≤0.15，說明試驗(yàn)結(jié)果有效。2. 特異性：不與其它可溶性結(jié)構(gòu)類似物交叉反應(yīng)。3. 重復(fù)性：板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于15%。4. 貯藏：2-8℃，避光防潮保存。5. 有效期：6 個(gè)月免責(zé)聲明1. 試劑盒僅供研究使用，不得用于臨床實(shí)驗(yàn)或人體實(shí)驗(yàn)，否則所產(chǎn)生的一切后果，由實(shí)驗(yàn)者承擔(dān)，本公司概不負(fù)責(zé)。2. 嚴(yán)格按照說明書操作，實(shí)驗(yàn)者違反說明書操作，后果由實(shí)驗(yàn)者承擔(dān)。
