本試劑盒只能用于科學研究，不得用于醫(yī)學診斷小鼠（Mouse）視黃酸（RA）ELISA 檢測試劑盒使用說明書檢測原理試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯免疫吸附試驗（ELISA）。往預先包被視黃酸（RA）抗體的包被微孔中，依次加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體，經過溫育并*洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的視黃酸（RA）呈正相關。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度（OD 值），計算樣品濃度。樣品收集、處理及保存方法1. 血清：使用不含熱原和內毒素的試管，操作過程中避免任何細胞刺激，收集血液后，3000 轉離心10 分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。2. 血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉離心30 分鐘取上清。3. 細胞上清液：3000 轉離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。4. 組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉離心10 分鐘取上清。5. 保存：如果樣本收集后不及時檢測，請按一次用量分裝，凍存于-20℃，避免反復凍融，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。自備物品1. 酶標儀（450nm）2. 高精度加樣器及槍頭：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL3. 37℃恒溫箱操作注意事項1. 試劑盒保存在2-8℃，使用前室溫平衡20 分鐘。從冰箱取出的濃縮洗滌液會有結晶，這屬于正常現象，水浴加熱使結晶*溶解后再使用。2. 實驗中不用的板條應立即放回自封袋中，密封（低溫干燥）保存。3. 濃度為0 的S0 號標準品即可視為陰性對照或者空白；按照說明書操作時樣本已經稀釋5 倍，zui終結果乘以5 才是樣本實際濃度。4. 嚴格按照說明書中標明的時間、加液量及順序進行溫育操作。5. 所有液體組分使用前充分搖勻。試劑盒組成名稱96 孔配置48 孔配置備注微孔酶標板12 孔×8 條12 孔×4 條無標準品0.3mL*6 管0.3mL*6 管無樣本稀釋液6mL 3mL 無檢測抗體-HRP 10mL 5mL 無20×洗滌緩沖液25mL 15mL 按說明書進行稀釋底物A 6mL 3mL 無底物B 6mL 3mL 無終止液6mL 3mL 無封板膜2 張2 張無說明書1 份1 份無自封袋1 個1 個無注：標準品（S0-S5）濃度依次為：0、50、100、200、400、800 nmol/L試劑的準備20×洗滌緩沖液的稀釋：蒸餾水按1：20 稀釋，即1 份的20×洗滌緩沖液加19 份的蒸餾水。洗板方法1. 手工洗板：甩盡孔內液體，每孔加滿洗滌液，靜置1min 后甩盡孔內液體，在吸水紙上拍干，如此洗板5 次。2. 自動洗板機：每孔注入洗液350μL，浸泡1min，洗板5 次。操作步驟1. 從室溫平衡20min 后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃。2. 設置標準品孔和樣本孔，標準品孔各加不同濃度的標準品50μL；3. 樣本孔先加待測樣本10μL，再加樣本稀釋液40μL；空白孔不加。4. 除空白孔外，標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標記的檢測抗體100μL，用封板膜封住反應孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。5. 棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液，靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復洗板5 次（也可用洗板機洗板）。6. 每孔加入底物A、B 各50μL，37℃避光孵育15min。7. 每孔加入終止液50μL，15min 內，在450nm 波長處測定各孔的OD 值。結果判斷繪制標準曲線：在Excel 工作表中，以標準品濃度作橫坐標，對應OD 值作縱坐標，繪制出標準品線性回歸曲線，按曲線方程計算各樣本濃度值。試劑盒性能1. 準確性：標準品線性回歸與預期濃度相關系數R 值，大于等于0.9900。2. 靈敏度：zui低檢測濃度小于10 nmol/L。3. 特異性：不與其它可溶性結構類似物交叉反應。4. 重復性：板內、板間變異系數均小于15%。5. 貯藏：2-8℃，避光防潮保存。6. 有效期：6 個月免責聲明1. 試劑盒僅供研究使用，不得用于臨床實驗或人體實驗，否則所產生的一切后果，由實驗者承擔，本公司概不負責。2. 嚴格按照說明書操作，實驗者違反說明書操作，后果由實驗者承擔。
