轉(zhuǎn)移因子的制備及檢定 （一） 原理轉(zhuǎn)移因子（TF）是一種可溶性不耐熱的小分子多核苷酸肽，分子量約3 500～5 000。56℃30min可滅活，低溫保存數(shù)年活性不消失。由于轉(zhuǎn)移因子能將供體某種特定的細(xì)胞免疫功能，特異地傳遞給受體，即具有傳遞特異性細(xì)胞免疫的作用，所以稱為轉(zhuǎn)移因子。另外它還能非特異地增強(qiáng)一般細(xì)胞免疫作用。轉(zhuǎn)移因子的作用發(fā)生迅速，給受體注射后數(shù)小時(shí)即出現(xiàn)皮試陽(yáng)性反應(yīng)。維持時(shí)間也較長(zhǎng)，可達(dá)數(shù)月至一年以上。轉(zhuǎn)移因子具有免疫特異性，能特異地轉(zhuǎn)移供體的遲發(fā)型超敏反應(yīng)，這種免疫轉(zhuǎn)移無種屬特異性，能在種間交叉轉(zhuǎn)移。由于轉(zhuǎn)移因子是小分子成分，無抗原性，長(zhǎng)期應(yīng)用，機(jī)體也不產(chǎn)生抗體。在實(shí)際工作中多采用動(dòng)物的脾、淋巴結(jié)或外周血白細(xì)胞制備轉(zhuǎn)移因子。 （二） 材料和方法 1 材料主要包括高速組織搗碎機(jī)、低溫冰柜、離心機(jī)、透析袋、紫外分光光度計(jì)及E玫瑰花環(huán)試驗(yàn)所用器材等。 2 方法主要有超濾法及透析法，大批量生產(chǎn)多用超濾法，小量制備可用透析法。下面僅介紹透析法。 （1） 制備勻漿：將凍存的豬（人）脾臟或淋巴結(jié)取出融化，摘除脂肪及結(jié)締組織，充分洗凈。用絞肉機(jī)絞碎，加適量生理鹽水后，用高速組織搗碎機(jī)高速勻漿2次，每次1min。將勻漿置－20℃凍結(jié)。 （2） 透析含量測(cè)定及凍干：將上述勻漿取出融化，以3 000r/min離心30m in，取上清，將上清置透析袋內(nèi)，用無熱原的冷生理鹽水在0～4℃環(huán)境下透析過夜，袋外透析液即為制備的轉(zhuǎn)移因子。取袋外透析液測(cè)核糖含量及吸收度，按測(cè)定結(jié)果進(jìn)行分裝并凍干。 （三） 檢定 1 鑒別 ①取本品1支，加水溶解，按分光光度法測(cè)定，在251±1nm處有zui大吸收度；260nm與280nm波長(zhǎng)處吸收度比值應(yīng)≥20；②取本品1支，加水溶解。取2ml加入適量茚三酮溶液，加熱后應(yīng)呈紫色。 2 酸堿度取本品10支，加水溶解，在酸度計(jì)上精密測(cè)定pH值，應(yīng)為6～8。 3 蛋白質(zhì)取本品1支，加水溶解，加入磺基水楊酸試液適量，混勻不得出現(xiàn)混濁。 4 水分按碘硫溶液法測(cè)定，不得超過3%。 5 安全試驗(yàn)取本品適量，加水溶解，小鼠尾靜脈注射適量，48h內(nèi)不得有死亡。 6 熱原取本品1支，加水溶解依法檢查，應(yīng)符合規(guī)定。 7 菌檢取本品3支，用無菌鹽水溶解，分別接種到檢查需氧菌、厭氧菌及霉菌用培養(yǎng)基上，37℃培養(yǎng)1周，應(yīng)無菌生長(zhǎng)。 8 核糖以標(biāo)準(zhǔn)D核糖為標(biāo)準(zhǔn)品，取本品3支分別測(cè)定，每支含核糖均不得低于60μg。 9 吸收度取本品5支，加水溶解，用分光光度法進(jìn)行測(cè)定，其吸收值應(yīng)為055左右。 10 超敏反應(yīng)取健康無傷豚鼠6只，每只腹腔注射本品適量，連續(xù)3次，于20日后再自耳靜脈注入本品適量，應(yīng)無超敏反應(yīng)現(xiàn)象發(fā)生。 11 乙肝抗原及抗體測(cè)定取本品1支，加水溶解，以放免法測(cè)HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBcAg、HBcAb，應(yīng)為陰性。 12 活性采用E玫瑰花環(huán)試驗(yàn)。對(duì)照管中加入淋巴細(xì)胞及綿羊紅細(xì)胞，試驗(yàn)管中加入淋巴細(xì)胞、綿羊紅細(xì)胞及適量本品。試驗(yàn)管E玫瑰花環(huán)率應(yīng)較對(duì)照管高20%以上。 （四） 注意事項(xiàng) 1 所用臟器應(yīng)新鮮，勻漿時(shí)應(yīng)*搗碎。 2 各步所用蒸餾水均無熱原。 3 轉(zhuǎn)移因子常溫下易喪失活性，因此，有關(guān)操作（如透析）應(yīng)在低溫下進(jìn)行。常溫下的各種操作均應(yīng)快捷迅速。 |
