連接酶鏈反應(ligase chain reaction,LCR)是繼PCR后,新出現的一種更加完善的DNA體外擴增和檢測技術。在檢測點突變等方面具有*的優(yōu)點。 (一) LCR的原理 該技術是利用DNA連接酶構建共價磷酸鍵,特異地連接雙鏈DNA,經加熱變性、退火和連接等步驟后,再多次反復循環(huán),從而使目的DNA得以大量擴增。 (二) LCR的主要用途 主要用途有以下三個方面。 1. 單堿基突變遺傳病的檢測 該技術在識別點突變方面優(yōu)于PCR,該技術首先用于單堿基突變遺傳病的診斷;據報道已用LCR識別了鐮狀細胞貧血患者珠蛋白基因發(fā)生的A→T替換。 2. 病原微生物的檢測可用于李氏桿菌、結核桿菌、淋球菌及沙眼衣原體等病原微生物種及亞種的鑒別。 3. 定向誘變LCR法能連接PCR擴增片段,進行多位點同時定向誘變,或隨機設計,因而是一種有效的基因改建和構造方法。 總之, LCR設計*,在某些方面特別是檢測點突變方面是有優(yōu)勢的,目前尚不能為其他手段取代,它作為一種DNA擴增和檢測技術,具有很大的發(fā)展前景 |