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主營(yíng):ELISA試劑盒,化學(xué)試劑,生物醫(yī)學(xué)試劑,生命科學(xué)科研產(chǎn)品.
 
酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒[ELISA Kit]
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免疫微載體技術(shù)
點(diǎn)擊次數(shù):1909 更新時(shí)間:2009-11-09
免疫微載體技術(shù)
 
    為進(jìn)一步提高血清學(xué)反應(yīng)的敏感性,加速對(duì)被檢標(biāo)本結(jié)果的報(bào)告時(shí)間,可應(yīng)用免疫微載體作為診斷液進(jìn)行檢測(cè)。這種診斷液系將已知抗體吸附在紅細(xì)胞、炭粉或乳膠等微載體上,制成所謂的固相抗體,它是一種仍保持抗體特性的固態(tài)診斷血清,用它進(jìn)行間接凝集反應(yīng)時(shí),不但可與相應(yīng)抗原發(fā)生特異結(jié)合,同時(shí)也可使吸附抗體的微量載體聚集在一起,這樣可使肉眼難以觀察到的微量抗原抗體結(jié)合物,尤其是微量的可溶性抗原-抗體結(jié)合物,形成肉眼可見(jiàn)的反應(yīng)產(chǎn)物,因而明顯地提高了血清學(xué)反應(yīng)的敏感性,反應(yīng)中的微載體起著“放大器”作用。
 
    (一) 間接紅細(xì)胞凝集試驗(yàn)
    即將已知的抗體球蛋白掛在經(jīng)醛化鞣酸化處理的紅細(xì)胞上,制成所謂的致敏紅細(xì)胞診斷液,用以實(shí)施反向間接血凝試驗(yàn),即在反應(yīng)板孔內(nèi),如診斷液與被檢的相應(yīng)抗原相遇時(shí),紅細(xì)胞即被凝集,形成鋸齒狀凝塊沉于孔底,即為陽(yáng)性反應(yīng),否則紅細(xì)胞自然下沉,于孔底形成圓點(diǎn)狀沉淀物為陰性反應(yīng)。另外,亦可用已知抗原致敏紅細(xì)胞制成診斷液檢測(cè)相應(yīng)抗體,此即正向間接血凝試驗(yàn)。
    間接血凝試驗(yàn)是一項(xiàng)準(zhǔn)確而敏感的血清反應(yīng),在敏感性方面表現(xiàn)得尤為突出,如可檢出每ml含100萬(wàn)個(gè)鼠疫桿菌、野兔熱桿菌或類(lèi)鼻疽桿菌,每ml含160萬(wàn)個(gè)炭疽芽胞、2 500萬(wàn)個(gè)布魯氏菌、5 000萬(wàn)個(gè)霍亂弧菌、0.04μg肉毒梭菌毒素等。不足的方面是由于紅細(xì)胞表面是一個(gè)復(fù)雜的有機(jī)結(jié)構(gòu),上面往往有許多抗原,可以和血清中的其他成分起反應(yīng),因而一定程度地影響試驗(yàn)的特異性。
 
    (二) 間接炭凝集試驗(yàn)
    即將已知的抗體球蛋白在一定溫度和pH值下吸附在細(xì)炭粉表面上,制成所謂的致敏炭粉診斷液,當(dāng)與相應(yīng)抗原在實(shí)施反應(yīng)的玻板上相遇時(shí),炭粉則被凝集,此時(shí)傾斜玻璃板觀察時(shí),則看到好似無(wú)數(shù)個(gè)黑色帶閃光的細(xì)砂粒在液滴中滾動(dòng),即為陽(yáng)性反應(yīng);如果液滴仍呈濃墨汁狀團(tuán)集一起,則為陰性反應(yīng)。
    炭凝集反應(yīng)的zui大特點(diǎn)是,對(duì)標(biāo)本的純度要求不甚嚴(yán)格,受雜質(zhì)的干擾較小。不足的方面是敏感性稍差,只能檢出每毫升含2500萬(wàn)個(gè)鼠疫桿菌、類(lèi)鼻疽桿菌或馬流產(chǎn)沙門(mén)氏菌,和1億個(gè)布魯氏菌和霍亂弧菌的標(biāo)本等。
 
    (三) 間接乳膠凝集試驗(yàn)
    是利用直徑為0.6~0.7μm的聚苯乙烯乳膠(polystyrene)作載體,吸附抗體,制成致敏乳膠診斷液,檢測(cè)含相應(yīng)抗原標(biāo)本的一種間接凝集反應(yīng)。它的原理和操作方法與上述的間接凝集試驗(yàn)類(lèi)似,只是采用人工合成的乳膠微球作載體,而不是天然的紅細(xì)胞或炭粉。在玻璃板上實(shí)施反應(yīng),當(dāng)致敏乳膠與相應(yīng)抗原相遇,如乳膠顆粒被凝集,則好似粉筆末飄浮在水中,為陽(yáng)性反應(yīng);液滴仍呈乳狀均等混濁,則為陰性反應(yīng)。
    乳膠凝集反應(yīng)的優(yōu)點(diǎn)在于快速,數(shù)分鐘即可初報(bào)結(jié)果;操作簡(jiǎn)便,無(wú)需特殊的儀器設(shè)備,在基層單位即可進(jìn)行。所以近幾年來(lái),國(guó)內(nèi)外已逐漸用其對(duì)沙門(mén)氏菌、炭疽桿菌、流行性感冒桿菌、嗜肺軍團(tuán)桿菌、腦膜炎雙球菌、肺炎球菌、葡萄球菌腸毒素(2×10-4μg/ml)和嗜鹽桿菌等作鑒定,以及對(duì)鉤端螺旋體患者血清抗體作檢測(cè)。不足的方面是,聚苯乙烯乳膠的性質(zhì)較脆弱,易受反應(yīng)環(huán)境中存在的雜質(zhì)的干擾,發(fā)生非特異性自家凝集,出現(xiàn)假陽(yáng)性反應(yīng)。
  
   
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